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3结果与讨论
3.1环盘微电极的制备与表征
图1A为环盘电极的制备过程图，中间为CFdisk电极，并被拉制的玻璃毛细管包被，玻璃管外壁利用溅射的方法镀一层Au膜，为了形成纳米Auring电极，侧壁用石蜡绝缘。所制备的环盘电极电镜表征图如图1C和1D所示，整个电极的外径约为40μm，CFdisk电极的直径约为7μm，纳米Auring的厚度约为350 nm。此外，在挑选的毛细管玻璃壁厚度和拉制仪温度下，CFdisk和Auring电极之间玻璃管的厚度约为10μm。
图2为环盘电极、CFdisk电极和Auring电极在5 mmol/LRu（NH3）6Cl3溶液中的循环伏安图。如图2实线所示，在0.5～+0.1 V的电位范围内，环盘电极中的CFdisk和Auring电极单独施加电位时，两个电极的循环伏安图为典型的稳态伏安曲线，
说明CFdisk和Auring均具有微电极的特征。为了考察CFdiskAuring电极中CFdisk电极和Auring电极之间是否存在扩散层交盖，并且可独立工作，使用两通道，将CFdiskAuring环盘电极中的两个电极同时施加电位，如图2虚线所示，CFdisk和Auring的循环伏安图也为稳态曲线，并且两个电极的电流大小和分别施加电位的图相同，说明两个电极之间未扩散层交盖。上述研究结果说明，此电极可用于两组分的同时检测。
3.2环盘电极对H2O2和DA的电化学响应
如前所述，利用Auring电极检测电刺激DA的释放，并通过电化学沉积的方法，将对H2O2有选择性催化的PB沉积在中间CFdisk电极上。H2O2虽然具有电化学活性，但是在一般电极上氧化还原过电位很大，氧化电位高于+0.6 V，还原电位低于
0.5 V，而PB在中性溶液中容易结构坍塌，因此用电聚合的方法将导电聚合物PEDOT原位聚合在PB/CFdisk电极上，用以保持PB在中性溶液的稳定性。图3为所制备的电极对H2O2和DA在中性溶液中的电化学响应图。PB/CFdisk电极修饰PEDOT前后循环扫描25圈的稳定性图如图3A和图3B所示，PB/CFdisk电极在+0.18 V有一对可逆的PB的氧化还原峰，氧化还原峰电流在循环扫描的过程中，因为PB在中性溶液中不稳定，电流逐渐减小，而经过PEDOT保护的PB/CFdisk电极，PB的氧化还原峰电流并未明显的降低，说明PEDOT对PB具有很好的保护作用。当在中性PBS中加入300μmol/L H2O2时，PB的氧化峰电流减小，还原峰电流增加（图3C），说明PB对H2O2具有良好的催化作用。DA在Auring电极上的电化学行为（图3D）表明，DA在+0.18 V处氧化电流到达稳态，说明DA在Auring电极上有很好的电化学响应。
图3 PB/CFdisk电极在电聚合PEDOT（A）前和（B）后在PBS溶液中的循环扫描（CV）图，扫速50 mV/s;（C）PEDOT/PB/CFdisk电极在PBS中加入300μmol/L H2O2前（a）、后（b）的CV图，扫速5 mV/s;（D）Auring电极在PBS中加入100μmol/L DA前（a）、后（b）的CV图，扫速50 mV/s
3.3环盘电极对H2O2和DA的电化学分析
为了避免环盘电极上H2O2和DA的相互干扰，本研究选择PEDOT/PB/CFdisk电极对H2O2的检测电位为0.05 V。首先考察了PEDOT/PB/CFdisk电极和Auring电极对H2O2和DA检测的线性和灵敏度，结果如图4所示。由图4A可见，在0.05 V电位下，在PBS溶液中连续加入一定浓度的H2O2时，PEDOT/PB/CFdisk电极具有良好的电流响应，H2O2浓度在1～29μmol/L范围内，电流响应与浓度呈现良好的线性关系（I（pA）=27.67-4.37CH2O2（μmol/L），R=0.98），检出限为0.4μmol/L（S/N=3）。Auring电极对DA也具有良好的响应，DA浓度在0.5～25μmol/L，其电流响应值与DA浓度呈良好的线性关系（I（nA）=0.40（nA）+0.45CDA（μmol/L），R=0.99），检出限为0.18μmol/L（S/N=3）。
进一步考察了环盘电极之间是否存在交叉干扰，结果如图5所示，当PBS溶液中加入20μmol/L H2O2后，Auring电极上未出现明显的电流变化，而PEDOT/PB/CFdisk电极上的电流则明显下降。加入图4（A）在PBS溶液中连续加入一定浓度的H2O2后PEDOT/PB/CFdisk电极的电流响应图。电位：0.05 Vvs.Ag/AgCl;（B）從图（A）中获取的电流信号值与H2O2浓度的线性关系;（C）在PBS中连续加入一定浓度的DA后Auring电极的电流响应及（D）从图（C）中获取的电流信号值与DA浓度的线性关系，电位：+0.3 V vs.Ag/AgClDA后，Au ring电极的电流出现了明显增加，而PEDOT/PB/CFdisk电极的电流未明显变化。
这些结果表明，PEDOT/PB/CFdiskAuring电极两个通道之间未交叉干扰，因此可用于MFB NAc脑区中H2O2和DA的同时检测。
利用计时电流法检测时，电极的稳定性也是活体分析要考虑的重点问题。如图6A所示，在2000 s内，PEDOT/PB/CFdisk电极能保持良好的稳定性。本研究采用溅射成膜方式形成的Auring电极，检测DA在2000 s内同样拥有良好的稳定性，这与文献[30]报道的金电极对DA检测具有良好的稳定性一致。
3.4鼠脑内的H2O2和DA的活体检测
为了证明Auring电极能够用于实时监测活体内DA的变化，将环盘电极植入到SD大鼠的NAc脑图6（A）在PBS溶液中加入10μmol/L H2O2后的PEDOT/PB/CFdisk电极的电流响应图。电位：-0.05 V vs.Ag/AgCl;（B）在PBS溶液中加入10μmol/L DA后的Auring电极的电流响应图。电位：+0.3 Vvs.Ag/AgCl区，并在MFB区域用双极电极进行电刺激（60 Hz，±300μA，3 s）。如图7A所示，在刺激后，Auring电极上记录到短暂的脉冲式电流变化，
这种释放模式与文献报道一致。但是，在刺激下未观察到H2O2浓度变化。为了考察PB/PEDOT/CFdisk电极能对H2O2具有响应，利用微灌注的方式，在微电极附近灌注H2O2（10 mmol/L），结果如图7B所示，灌注H2O2 100 s后，电流逐渐下降，并达到峰值;停止灌注后，电流又恢复到基线值，说明PB/PEDOT/CFdisk电极对在活体内对H2O2也具有良好的响应。
4结论
制备了用于H2O2和DA检测的环盘微电极，此电极对H2O2和DA均有良好的电流响应和稳定性。PEDOT/PB/CFdisk电极和Auring电极之间未交叉干扰，可检测活体内H2O2和DA浓度的变化。虽然在电刺激的过程中未观察到二者浓度同时变化，但此方法可用于其它的生理或者病理过程中有关H2O2和DA浓度的变化，并促进与之相关的生理和病理的研究。
