【摘要】目的分析弓形虫感染对大鼠、小鼠血清一氧化氮浓度的影响。方法从实验室中挑选出36只雌性的大鼠分成6组，每组6只。其中1组是正常对照组；2组是弓形虫感染组；3组是地塞米松体重，隔天给予皮下注射，2周后停止注射；4组是地塞米松，隔天皮下组织注射2周后感染弓形虫，并且停止注射；5组是试验期间，地塞米松隔天皮下组织注射；6组同五组基本相同，在隔天给予皮下组织注射后，继续注射地塞米松。每周观察实验大鼠的血液分离的血清浓度。第6周时处死大鼠，收集血清，将弓形虫感染鼠的脑组织均浆转种小鼠，并以脑组织为基本模板，RCR扩增弓形虫SAGI基因。雌性昆明小鼠有36只，出于弓形虫感染后5个小时处死6只小鼠，应用硝酸根还原酶法测定大鼠和小鼠血清一氧化氮浓度。


结果正常组大鼠在平均6周后一氧化氮的浓度比2-5组大鼠的血清浓度要高很多，2组大鼠感染弓形虫后，血清一氧化氮在第3周时逐渐提升，最后持续下降，至第6周比3组大鼠的一氧化氮浓度要上升。至第5周升到最高点时，呈现下降趋势，应用PCR的方法从五组中的一只大鼠的脑组织扩增SADI片段。结论应用地塞米松可以减少大鼠的血清一氧化氮情况，弓形虫感染也可以提升大鼠血清一氧化氮的水准，注射地塞米松或是在实验检测当中出现未注射地塞米松的大鼠感染弓形虫后其血清一氧化氮的水准也会逐渐升高，但升高的幅度与速度并不相同，未注射地塞米松的大鼠所呈现的升高趋势更加快速。小鼠感染弓形虫后血清一氧化氮的情况是现减少再提升，但不能够避免小鼠出现急性感染导致死亡的现象出现。


弓形虫是临床中比较罕见性的专门寄生在有核细胞体内的机会性致病原虫感染菌，并且可以做到长时间的寄托在宿主体内，通常也是人们畏惧的艾滋病疾病等器官移植等患者的免疫功能受到损害或是出现现感染并发症导致死亡的重要因素。针对弓形虫的宿主来详细分析，其分布的面积比较广，针对不同动物所对待的弓形虫存在容易感染的症状均不一样。在实施动物当中，小鼠对弓形虫感染后5个小时后会出现死亡迹象。而大鼠则是不敏感，正常大鼠感染弓形虫后，仍然是不明显的临床表现和身体特征。根据相关的报道显示，大鼠对弓形虫具有较强的抵抗力，可以通过应用免疫系统来压制感染菌，肾上腺皮质激素在注射后，可以有效减少大鼠其巨吞噬细胞的能力。现报告如下。


1资料与方法


1.1一般资料


应用实验室中的DNA试剂盒作为辅助测试，应用来自美国的生物工程公司，针对安徽生物工程有效公司出品，在实验室给地塞米松药液注射，需要采用广东南部药液公司所出品为主。针对一氧化化氮所测定的试剂盒和硝酸银，都是来自南京建成生物工程有效公司。


1.2实验动物


针对实验室中的雌性大鼠以及清洁级雌性昆明小鼠都是由南方医科大学实验中心所给予提供。


2-5组大鼠均在第3周给予腹腔种植弓形虫株。每组大鼠在每周给予静脉采血，待血液凝固后，离心分离血清，并且放在零下20度的设备中给予冷藏备用。在大鼠感染弓形虫后的4周时，向其腹腔注射适量的钠溶液，打麻醉后打开腹腔，腹部主动采集血液，放到温度低的设备中等待凝固，2个小时候后分离血清。取出弓形虫感染大鼠的脑组织进行均浆，并且还要取出一部分均浆液体用于提取DNA备用。


1.4小鼠实验


所有经过实验小鼠的数量为30只，均在统一接受腹腔接种弓形虫RH株种植10只后，分别于感染后5个小时，处死6只，正常组大鼠在平均6周后一氧化氮的浓度比2-5组大鼠的血清浓度要高很多，2组大鼠感染弓形虫后，血清一氧化氮在第3周时逐渐提升，最后持续下降，至第6周比3组大鼠的一氧化氮浓度要上升。至第5周升到最高点时，呈现下降趋势，应用PCR的方法从五组中的一只大鼠的脑组织扩增SADI片段。给予摘眼球采血技术，并且对于正常的昆明小鼠6只，给予摘眼球采血措施，在血清浓度上进行对比实验。


1.5微电极测定：


用unisense微剖面系统监测实验小鼠血清标本中的NO的剖面浓度。Unisense一氧化氮微电极（NO-100）结合使用马达控制系统自动测试了实验小鼠血清中的一氧化氮的垂直浓度剖面图，使用自动马达测试时，NO微电极移动步径为100um。


1.6统计学处理


将1-6组大鼠和小鼠的实验资料以及各项研究数据准确的录入SPSS16.0统计学软件，平均年龄等计量资料描述为（），检验方法为t检验；计数资料描述为[n（%）]，检验方法为x2检验。若P<0.05，代表观察组以及对照组数据间的差异显着，有统计学意义。


2结果


2.1分析6组大鼠血清一氧化氮浓度测定结果


经过研究发现，正常组大鼠在平均6周后一氧化氮的浓度比2-5组大鼠的血清浓度要高很多，2组大鼠感染弓形虫后，血清一氧化氮在第3周时逐渐提升，最后持续下降，至第6周比3组大鼠的一氧化氮浓度要上升。至第5周升到最高点时，呈现下降趋势，应用PCR的方法从五组中的一只大鼠的脑组织扩增SADI片段。详情见以下表格。


2.2脑匀浆转种小鼠结果


5组实验室内的大鼠脑组织匀浆转种小鼠，其余均未分离出。


2.3分析PCR结果


经过研究得知，4组1-6组大鼠脑组织扩增出大小为522 bp特异的SAG1片段，其他大鼠结果呈现阴性，其PCR结果见图2。


3、讨论


现如今，对杀灭或是控制弓形虫速殖的机制还并不是完全的掌握，但一氧化氮被认为在感染菌当中起到了很重要的作用。为了分析大鼠和小鼠对弓形虫容易感染的不同与其体内的血清一氧化氮水平的不同关系，以此地塞米松对弓形虫感染对大鼠血清一氧化氮水平的有直接的影响。面对实验室内部的一氧化氮广泛的出现在每个组织当中，在出现免疫调解等情况中起到了很多重要的影响。很多疾病因素能够出现一氧化氮表达在逐渐提升，从而造成大量的血清组织浓度，从而可以有效提高激发特异性免疫功能和避免感染菌。一氧化氮在弓形虫感染被认为最重要的因素附在宿主的体内。针对实验的大鼠和小鼠详细情况显示，大鼠体内的一氧化氮对抗体起到了很大的保护作用。


综合上述分析可以有效明确，以上实验结果为，正常组大鼠在平均6周后一氧化氮的浓度比2-5组大鼠的血清浓度要高很多，2组大鼠感染弓形虫后，血清一氧化氮在第3周时逐渐提升，最后持续下降，至第6周比3组大鼠的一氧化氮浓度要上升。至第5周升到最高点时，呈现下降趋势，应用PCR的方法从五组中的一只大鼠的脑组织扩增SADI片段。采用地塞米松可以减少大鼠的血清一氧化氮情况，弓形虫感染也可以提升大鼠血清一氧化氮的水准，注射地塞米松或是未注射地塞米松的大鼠感染弓形虫后其血清一氧化氮的水准也会逐渐升高，但升高的幅度与速度并不相同，未注射地塞米松的大鼠所呈现的升高趋势更加快速。小鼠感染弓形虫后血清一氧化氮的情况是现减少再提升，但不能够避免小鼠出现急性感染导致死亡的现象出现。